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基因组编辑技术与斑马鱼

 

                                                      



第二十三期 基因组编辑技术与斑马鱼模型在研究疾病发生机制中的运用
               2019年9月20-21日 周五-周日 25日报到 (理论与实验相结合)
参会学员免费获得一份CRISPR/Cas9三合一对照质粒

主讲老师:赵庆顺 教授
南京大学 模式动物研究所 遗传学与发育生物学教授 博导
学士(1983-1987,南京大学)、硕士(1987-1990,南京大学)、博士(1996-2001,普渡大学)
2001-2003年在杜克大学医学中心进行博士后训练
2003年全职加入南京大学模式动物研究,2006年晋升为教授
具多年的国自然和省自然项目申请书的写作及评审心得

本期课程安排
第一天上午9:00-12:00  下午13:00-17:00
第一讲、CRISPR/Cas9基因组编辑技术的工作原理
1、基因组靶向修饰技术发展简史(从基因打靶到基因编辑)   2、CRISPR/Cas9基因组编辑技术的工作原理       

第二讲、CRISPR的设计
1、CRISPR设计的依据及原则    2、常用CRISPR设计软件简介(CRISPR的在线设计简介)   3、靶向编辑基因的基因型确认及CRISPR的再设计

第三讲、CRISPR/Cas9基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略
1、DNA形式的基因组编辑工具的制备与递送   2、RNP形式的基因编辑工具的制备与递送
实验一: CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建(1) CRISPR模板的制备
选做实验或参观:模式动物斑马鱼养殖条件规范(江苏省地方标准立项简介)/斑马鱼胚胎显微形态学观测

第四讲、sgRNA活性验证
1、插入缺失(Indel)突变检测的基本策略  2、基于胚胎反应器的活性验证方法 3、基于细胞系的活性验证方法
实验二: CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建(2)
CRISPR模板与线性化All-in-One载体的重组、 转化、 携带基因组编辑工具的转化子的培养
选做实验或参观:斑马鱼胚胎显微注射/斑马鱼胚胎显微形态学观测
第二天上午9:00-12:00     下午13:00-17:00
第五讲、利用CRISPR技术创制基因组编辑细胞系
1、基因敲入(如点突变和报告基因等)的供体设计原则及实例分析    2、基因组编辑工具导入细胞系的方法(转染与转导)   3、基因组编辑细胞系的筛选及基因型的快速确认      4、基因编辑子的功能确认策略
实验三:CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建(3)  阳性转化子的快速验证法(PCR法)
实验四:基因组编辑子的基因型鉴定 (1)  基因组DNA模板的快速制备、目标基因组DNA片段的PCR扩增
选做实验或参观:斑马鱼胚胎显微形态学观测/斑马鱼基因编辑突变体的基因型鉴定

第六讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入动物突变体(斑马鱼基因敲除突变体的制作)
1、RNP基因组编辑工具(和供体)递送至受精卵  2、初建者(F0)体细胞携带靶向突变等位基因的鉴定    3、基因组编辑突变体的筛选及建系(F1)  4、基因编辑子的功能确认策略 
实验五:CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建(3)    电泳确认
实验六:基因组编辑子等位基因的基因型鉴定 (2)  电泳识别基因组编辑突变体
选做实验:斑马鱼基因编辑突变体的基因型鉴定结果确认/斑马鱼胚胎显微形态学观测

第七讲、利用CRISPRi或CRISPRa技术调控基因在细胞或胚胎中的表达
1、dCas9的特征简介   2、运用CRISPR技术调控基因在细胞中表达的基本实验过程   3、CRISPR技术的转录抑制  4、CRISPR技术的转录活化   5、碱基编辑技术   6、核酸检测

第八讲、斑马鱼模型在研究疾病发生机制中的运用
1、科学问题的提出    2、与疾病共分离的遗传突变的常见类型   3、评价人突变基因的斑马鱼模型的建立(CRISPRi法基因敲降法、CRISPR法基因敲除、或过表达)    4、斑马鱼模型表型模拟人类疾病临床特征(显微形态学、组织学、转录组学)     5、利用斑马鱼模型解析疾病发生机制研究的一般策略

第三天上午9:00-12:00(12:00以后课程结束)
第九讲、CRSIPR/Cas9基因组编辑技术的脱靶问题
1、脱靶的产生原因    2、脱靶检测   3、解决脱靶问题的方法  4、脱靶问题对不同领域研究者的意义

自由讨论:如何利用基因组编辑技术和斑马鱼模型回答关键科学问题、提前准备自然科学基金申请的前期研究工作基础。

第十讲 “基因编辑婴儿”事件及CRISPR技术的伦理学问题
1、 “基因编辑婴儿”事件    2、新型基因组编辑技术的发展   3、基因组编辑技术的应用  4、基因组编辑技术应用的伦理学问题



【主办单位】
玮瑜科研平台(上海玮瑜生物科技有限公司)
【承办单位】
上海玮瑜生物科技有限公司
【时间地点】
时间:2019年9月20-22日  19日报到
地点:南京 南京工业大学绿色建筑产业科技园

【住宿说明】 
为了便于接送、统一指定南京新逸天金丝利酒店,住宿自理
标准间(含早)360元/人  合住180元/人 南京浦口高新区丽景路8号
【会务费用】
3400元/人。授课期间发放纸质邀请函(盖章)和发票。按交费先后顺序确定座位号。会务期间提供午餐,晚餐自理。
【指定账户】
A:银行转账
户名:上海玮瑜生物科技有限公司 
账户号:97340154740007035
开户行:上海浦东发展银行大华支行
B:支付宝转账
收款人:
wybiot@163.com
支付宝户名:上海玮瑜生物科技有限公司
C:现场刷卡或现金:支持公务卡
说明:汇款时写上您的姓名,如果朋友代付一定要注明您本人的名字,便于好查询。
【联系人】
联系人:谢老师 13611825136    
报名邮箱:
wybiot@126.com
                                                

报名方式

1、邮件报名:将您的手机姓名发送到wybiot@126.com并编辑参会二字.

2,电话报名:您直接电话工作人员 索取报名表

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